PBMC Cryopreservation Medium

Области применения 

Для криоконсервации мононуклеарных клеток периферической и пуповинной крови, а также лейкоцитарной взвеси.

Описание продукта

Данный продукт, основанный на принципе технологии контроля льда для криоконсервации клеток, представляет собой готовую к использованию среду для криоконсервации клеток с заданным химическим составом, не содержащую сыворотки и белков.

Инструкция по применению

Этот продукт стерилен и может использоваться непосредственно без разведения. Все процедуры культивирования клеток следует проводить в стерильной среде во избежание контаминации.

Криоконсервация

1. Соберите мононуклеарные клетки из периферической крови или пуповинной крови, центрифугируйте клетки (500 × g, 5 минут, комнатная температура) и удалите надосадочную жидкость. 
2. Ресуспендируйте клеточный осадок в соответствующем растворе (физиологический раствор, культуральная среда или DPBS), затем проведите подсчет клеток и определение уровня выживаемости клеток. Предпочтительным является уровень жизнеспособности более 90% перед криоконсервацией. Затем центрифугируйте (500 × g, 5 минут, комнатная температура) и удалите надосадочную жидкость. 
3. Ресуспендируйте клеточный осадок, используя полученный продукт, до достижения плотности клеток 1×10⁶-1×10⁸/мл и объема замораживания 0,5-1,5 мл/пробирка. При использовании криоконсервационного пакета для криоконсервации больших объемов, пожалуйста, свяжитесь с технической командой для получения запрограммированной кривой охлаждения. Пользователи также могут добавлять аутологичную плазму, сыворотку или HSA в соответствии с экспериментальными потребностями для улучшения жизнеспособности после размораживания. 
4. Перенесите криопробирку в морозильную камеру при температуре -80℃. Если требуется длительное замораживание, перенесите ее в жидкий азот через 12 часов.

Размораживание

1. После извлечения из жидкого азота немедленно погрузите криопробирку в водяную баню при температуре 37℃, перемешайте для быстрого размораживания клеток в течение 2 минут. 
2. Перенесите размороженные клетки в коническую пробирку, медленно добавьте 9-кратный объем соответствующего разбавителя. 
3. Выровняйте концентрацию, осторожно переворачивая пробирку 10 раз. 
4. Центрифугируйте (500 × g, 5 минут, комнатная температура) и удалите надосадочную жидкость. 
5. Ресуспендируйте клеточный осадок в соответствующей среде/растворе. 
6. При необходимости проведите анализ количества клеток. 
7. Приступайте к дальнейшему применению.

Тест на жизнеспособность

Добавьте размороженные клетки в 4-кратный объем полной культуральной среды, перенесите в центрифужную пробирку и центрифугируйте в течение 5 минут. Удалите надосадочную жидкость, ресуспендируйте клетки с использованием DPBS или полной культуральной среды, а затем проверьте уровень выживаемости клеток. 

Примечание

1. После получения продукта поместите его в холодильник при температуре 2-8℃ для хранения. 
2. Во избежание загрязнения, открывайте крышку флакона в стерильных условиях.