Cell Cryopreservation Medium（DMSO-free）

Области применения 

Для криоконсервации различных типов клеток, таких как периферические мононуклеарные клетки крови (PBMC), стволовые клетки, Т-клетки и др.

Описание продукта

Основанный на принципе технологии контроля льда для криоконсервации клеток, этот продукт представляет собой готовую к использованию среду для криоконсервации клеток с заданным химическим составом, не содержащую сыворотки, ДМСО, белков и компонентов животного происхождения.

Инструкция по применению

Этот продукт стерилен и может использоваться непосредственно без разведения. Все процедуры культивирования клеток следует проводить в стерильной среде во избежание контаминации.

Криоконсервация

1. Соберите клетки для заморозки, центрифугируйте их (400 × g, 5 минут, комнатная температура) и удалите надосадочную жидкость. 
2. Ресуспендируйте клеточный осадок в соответствующем растворе (физиологический раствор, культуральная среда или DPBS), затем подсчитайте клетки и определите уровень их выживаемости. Предпочтительная жизнеспособность клеток перед криоконсервацией составляет более 90%. Затем центрифугируйте (400 × g, 5 минут, комнатная температура) и удалите надосадочную жидкость. 
3. Ресуспендируйте клеточный осадок, используя полученный продукт. Для стволовых клеток рекомендуемая плотность клеток составляет 1×10⁶-1×10⁸/мл. Для PBMC и αβ-T клеток рекомендуемая плотность клеток составляет 1×10⁶-2×10⁷/мл. Объем замораживания должен составлять 0,5-1,5 мл/пробирку. При использовании криоконсервационного пакета для криоконсервации больших объемов, пожалуйста, свяжитесь с технической командой, чтобы получить запрограммированную кривую охлаждения. Пользователи также могут добавлять аутологичную плазму, сыворотку или HSA в соответствии с экспериментальными потребностями для улучшения жизнеспособности после размораживания. 
4. Перенесите криопробирку в морозильную камеру при температуре -80℃. Если требуется длительное замораживание, перенесите ее в жидкий азот через 12 часов.

Размораживание

1. После извлечения из жидкого азота немедленно погрузите криопробирку в водяную баню при температуре 37℃, перемешайте для быстрого размораживания клеток в течение 2 минут. 
2. Перенесите размороженные клетки в коническую пробирку, медленно добавьте 9-кратный объем соответствующего разбавителя. 
3. Выровняйте концентрацию, осторожно переворачивая пробирку 10 раз. 
4. Центрифугируйте (400 × g, 5 минут, комнатная температура) и удалите надосадочную жидкость. 
5. Ресуспендируйте клеточный осадок в соответствующей среде/растворе. 6. При необходимости проведите анализ количества клеток.
7. Приступайте к дальнейшему применению.

Тест на жизнеспособность

Добавьте размороженные клетки в 4-кратный объем полной культуральной среды, перенесите в центрифужную пробирку и центрифугируйте в течение 5 минут. Удалите надосадочную жидкость, ресуспендируйте клетки, используя DPBS или полную культуральную среду, а затем проверьте скорость выживаемости клеток.

Примечание

1. После получения товара, пожалуйста, поместите его в холодильник с температурой 2-8℃ для хранения.
2. Во избежание загрязнения, пожалуйста, открывайте крышку бутылки в стерильных условиях.